Este test se utiliza igualmente para valorar la integridad de la membrana del espermatozoide.

Para su realización, los espermatozoides se introducen en una solución hipoosmótica para que entre dentro del espermatozoide. A partir de ahí el efecto es el siguiente: Un espermatozoide vivo, mantiene su membrana intacta, controlando la entrada y salida de sustancias y ante la presencia de la solución hipoosmótica, absorbe agua y se hincha su cola, enrollándose en forma de globo. Un espermatozoide muerto tiene una membrana desestructurada con zonas rotas que no reacciona y se mantiene recto sin enrollar su cola.

Esta técnica es muy importante en casos donde la muestra contiene solo espermatozoides inmóviles ya que la práctica de dicho test no mata a los espermatozoides por lo que pueden ser utilizados en reproducción asistida. A diferencia del test de Eosina que si los mata.